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本制品包含高保真DNA聚合酶、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×。使用时只需加入模板、引物，并补足水至Mix终浓度为1×即可。本制品中的高保真DNA聚合酶来自于基因工程改造的pfu，大大提高了扩增速度、保真性和产量。本制品是非长片段超保真快速扩增的首选产品。本制品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。PCR产物为平末端，不需要加A头，可直接用平末端系列载体（货号ALH333、ALH335）克隆。

• 扩增速度快：延伸速度可以达到2～4kb/min，是pfu的4～8倍。
  
• 扩增产量高：一般PCR产物量比传统pfu产量高50%～100%。
  
• 优异保真性：保真度是taq的54倍以上。一般随机挑一个菌测序便是正确无突变菌落。
  
• 扩增长度指标和pfu一致，可以完全替代pfu进行快速高保真扩增，但不建议用于pfu无法扩增的长片段。
  • 以复杂基因组DNA为模板适合扩增不超过3kb左右的产物，以简单基因组、质粒和噬菌体DNA为模板适合扩增不超过6kb左右的产物。

• 扩增速度快，质粒和简单基因组等简单模板可以采用15～20秒/kb；复杂模板如人类基因组可以采用30～45秒/kb。
  
• 对于GC含量很高的模板，预变性和变性温度可以提高到98℃。
  
• 耐热性强，98℃对聚合酶的活性无改变。
  
• 如果扩增模板GC含量高或者模板复杂扩增效果不佳时，可在反应混合物中加入DMSO到终浓度1%～8%，按照1%梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0～1.7M。并采用降落PCR(Touchdown PCR)。

• 建议PCR反应体系
  

  成分	25μL体系	50μL体系	终浓度
  2×Fast&HiFi PCR MasterMix	12.5μL	25μL	1×
  Forward Primer(10μM)	0.5μL	1μL	0.2μM
  Reverse Primer(10μM)	0.5μL	1μL	0.2μM
  模板DNA	x μL	y μL
  ddH2O	至25μL	至50μL

  • 模板参考用量(50μL)：质粒(0.1～10ng)、细菌基因组(10～100ng)、人类基因组(50～150ng)、cDNA(1～5μL)。
• 建议PCR反应程序
  

  步骤	温度	时间	循环数
  预变性	95℃	3min	1
  变性	95℃	10sec	30
  退火	55℃	10～15sec
  延伸	72℃	15～30sec/kb
  终延伸	72℃	2-5minutes	1
  	4～8℃	Hold	-